人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時(shí)候，胰蛋白酶作用的時(shí)間是在1～3分鐘，由于我有好幾個(gè)培養(yǎng)瓶（4個(gè)以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個(gè)培養(yǎng)瓶一個(gè)培養(yǎng)瓶這么分開(kāi)做，還是可以幾個(gè)同時(shí)做呢？同時(shí)做我怕后來(lái)操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過(guò)度啊！一個(gè)一個(gè)的做會(huì)不會(huì)又太費(fèi)時(shí)呢？

培養(yǎng)基 D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：33.5攝氏度。
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

1、一個(gè)一個(gè)做！防止污染，和消化細(xì)胞時(shí)間的不均勻。

2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個(gè)一個(gè)的做。但是如果你能保證無(wú)菌操作的原則，人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時(shí)間，是可以同時(shí)做，這樣效率高。建議你剛開(kāi)始一個(gè)一個(gè)的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個(gè)可以同時(shí)做，時(shí)間到了用移液槍給4個(gè)瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強(qiáng)烈建議一個(gè)一個(gè)處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)消化都不敏感，不然很容易消化過(guò)度或者不到位。另外同時(shí)處理多個(gè)細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒(méi)救，比細(xì)菌污染還要麻煩。

5、剛開(kāi)始還是一個(gè)一個(gè)來(lái)，人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研消化的時(shí)間與細(xì)胞的來(lái)源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時(shí)間較長(zhǎng)。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時(shí)間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時(shí)間要短一些，不然會(huì)消化過(guò)了，對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時(shí)，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見(jiàn)細(xì)胞開(kāi)始變亮，皺縮，卷邊的時(shí)候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候沒(méi)有迅速解凍的緣故，后一次成功是因?yàn)樽⒁獾竭@個(gè)問(wèn)題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞取出后沒(méi)有在盡可能短的時(shí)間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生很多冰晶對(duì)細(xì)胞就有致命的損失了。另外，細(xì)胞的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個(gè)月就不行了，并且狀態(tài)會(huì)很差。ZYC3821    神經(jīng)前體細(xì)胞培養(yǎng)基    NPrCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822     神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基    NM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823     少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)基    OPCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824     球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基    OsM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825     角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基    KM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826     角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基（確定）     KM-d    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3827    成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基    FM-sf    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3828    扁桃體上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    TEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3829     口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基    OKM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3830    結(jié)腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    CoEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3831     支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基    BEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 

人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

使用權(quán)限 A類注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購(gòu)買提供的*培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通交流。
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實(shí)現(xiàn)為科學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代，不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷、治療。
2）公司細(xì)胞資源中心承諾盡zui大努力對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源相關(guān)信息進(jìn)行及時(shí)更新。但限于我們的技術(shù)條件，中心不保證其準(zhǔn)確性。
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注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。